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等温滴定微量热仪是如何工作的?

发布时间:2022-12-02      点击次数:315
   等温滴定量热仪(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是一种研究分子间相互作用的非标记技术(Label-Free Technique),它通过检测分子间相互作用过程中由于价键形成或者打开而造成的放热或者吸收现象来计算分子间相互作用的定性和定量信息,包括作用有无结合、结合强弱(亲和力),结合比例(化学计量比),作用机制(ΔH, ΔS和ΔG等),酶促动力学(Km, Ki, kcat)等等。

   等温滴定量热仪主要由隔热夹套包裹着的样品池、参比池、注射器和计算机组成,注射器同时具有搅拌作用,计算机控制温度控制装置和信息反馈系统。恒温条件下当滴定进行前,首先反馈系统给样品池一个连续的能量确定基线。滴定进行时,注射器滴入反应物与样品池中被滴定物相互作用反应,形成复合物。复合物的形成伴随着能量的释放或吸收,导致样品池温度的变化,参比池始终保持在实验温度,反馈系统提供热或降低热量来补偿样品池的温度变化,每注射一次后系统恢复至平衡状态再进行下一滴滴定。结果以峰的形式表示平衡温度偏移所需要的能量,峰的面积相当于反应释放或吸收的热量。随着池中反应趋于饱和,热量信号逐渐减弱知道只看到背景热量。最后将热量进行积分并运用合适的结合模型得到亲和力、化学计量比、和反应焓变等。

   MicroCal PEAQ-ITC 是一款高灵敏度、低容量的等温滴定微量热仪,可用于生物分子相互作用的无标记溶液内研究。 它可以在单次实验中直接测量所有结合参数,并且可使用低至 10µg 容量的样品对无论是高亲和力还是低亲和力的结合剂进行分析。 半自动维护可减少操作人员的干预,系统可升级至全自动 MicroCal PEAQ-ITC Automated。